慢病毒介导稳定表达 Cas9 蛋白的鸡成纤维细胞系构建及其活性验证

【目的】筛选稳定表达 Cas9 蛋白的鸡成纤维细胞系（DF-1）,并基于单链退火修复机制（Single Strand Annealing, SSA）的报告载体系统,检测 DF-1 细胞系中的 Cas9 核酸酶活性。【方法】将携带 Cas9 蛋白的慢病毒载体质粒与辅助质粒一起转染 293T 细胞包装慢病毒,收集慢病毒 Cas9 上清液感染 DF-1 细胞,经抗生素筛选得到稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞,分别用 PCR 和 Western blot 验证阳性 DF-1 细胞表达 Cas9 蛋白的情况;选择鸡卵清白蛋白（OVA）基因的 sgRNA 序列,将 sgRNA 退火产物克隆至 pYP152 构建 sgRNA 表达载体,并在 sgRNA 靶位点两端设计引物扩增 OVA 基因靶片段,将靶片段克隆至报告载体 pCMV-SSA-mCherry-Hind Ⅲ,以破坏 mCherry 蛋白的表达,之后再将 sgRNA 表达载体与 SSA 报告载体共同转染稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞,最后在荧光显微镜下分析不同稳转株对 mCherry 蛋白表达的修复情况。【结果】经抗生素筛选得到 27 株稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系,采用 PCR 扩增稳转细胞基因组,结果显示这些细胞具有 Cas9 蛋白基因序列,Western blots 试验结果显示上述稳转细胞株均表达 Cas9 蛋白;sgRNA 表达载体与 mCherry-SSA 报告载体共转后,通过荧光显微镜观察发现筛选到的稳转细胞株均可恢复报告载体中 mCherry 蛋白的表达。【结论】成功构建了具有切割活性的稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系,可为后续在稳定表达 Cas9 蛋白的 DF-1 细胞系上开展鸡相关功能基因研究提供基础材料。     

AFB1降解菌的分离鉴定、降解条件优化及降解产物毒性评估

【目的】从土壤样品中筛选能降解黄曲霉毒素B（ 1 Aflatoxin B₁,AFB₁）的菌株,并研究其对AFB₁的降解性质及抑制黄曲霉菌能力,评估其作为微生物降解AFB₁制剂的潜力,为进一步开发AFB₁脱毒剂提供参考依据。【方法】以香豆素为唯一碳源,筛选出1株高效的AFB₁降解菌,通过16S rRNA基因测序得知菌株所属种属,并利用高效液相色谱确定菌株降解AFB₁的特性,通过单因素试验优化该菌株降解AFB₁的效率,共培养分析其对黄曲霉菌的抑制作用,最后利用SOS显色反应评估菌株对AFB₁的脱毒效果。【结果】通过液相色谱检测,获得1株菌株GDAAS003对AFB₁的降解率相对较高,其16s rRNA基因序列与链霉菌Streptomyces cerasinus SR3-134（LC128347.1）的相似性高达100%,菌株降解AFB₁的活性物质主要存在于上清液中,可能为胞外酶。GDAAS003上清液降解AFB₁的最佳pH为8.0的磷酸盐缓冲液,最适反应温度为30℃。经优化,菌株GDAAS003上清液对50 ng/mL AFB₁ 96 h的降解率可达90.50%,对100 ng/mL AFB₁ 96 h的降解率为75.68%。对降解产物的遗传毒性进行检测,结果表明菌株GDAAS003降解AFB₁的产物未表现出毒性,同时GDAAS003能抑制玉米中黄曲霉菌合成AFB₁。【结论】链霉菌GDAAS003既能以较高的降解效率降解AFB₁,又能抑制黄曲霉菌的生长,其在食品和饲料行业中有较大的商业应用前景。     

日粮代谢能和蛋白质水平对30-39周龄岭南黄羽肉种鸡繁殖性能的影响

【目的】研究日粮中不同代谢能（ME）和蛋白质（CP）水平对产蛋高峰期（30—39周龄）岭南黄羽肉种鸡生长性能、产蛋性能和孵化性能的影响。【方法】采用3（ME：11.09、11.51和11.92 MJ•kg-1）×3（CP：15.5%、16.5%和17.5%）两因子试验设计,选取1 134只健康的30周龄快大型岭南黄羽父母代肉种鸡,随机分成9组,每组6个重复,每个重复21只。试验期10周。统计各个重复的体增重、料蛋比、产蛋率、日产蛋重、平均蛋重、种蛋破损率、不合格蛋比率、受精率、18日活胚率、孵化率和健雏率。【结果】（1）11.92 MJ•kg-1ME处理组试验鸡只的体增重显著高于11.51 MJ•kg-1ME处理组（P＜0.05）,极显著高于11.09 MJ•kg-1ME处理组（P＜0.01）,其料蛋比显著低于11.51和11.09 MJ•kg-1ME处理组（P＜0.05）;而CP水平对试验鸡只的体增重和料蛋比无显著性影响（P＞0.05）;（2）产蛋性能：11.92 MJ•kg-1ME处理组产蛋率和日产蛋重最高（P＜0.01）;11.51和11.92 MJ•kg-1ME处理组平均蛋重显著高于11.09 MJ•kg-1ME处理组（P＜0.05）;11.92 MJ•kg-1ME处理组种蛋破损率也高于11.51和11.09 MJ•kg-1ME处理组（P＜0.05）;不合格蛋比率以11.09 MJ•kg-1ME处理组最高（P＜0.05）,ME和CP水平对试验鸡只不合格蛋比率具有显著的互作效应（P＜0.05）;与CP 15.5%处理组相比,日粮CP水平为16.5%和17.5%时,显著提高了平均蛋重,并显著降低了种蛋破损率（P＜0.05）;（3）孵化指标：日粮ME为11.92 MJ•kg-1或CP为16.5%时,雏鸡初生重显著高于其它处理组（P＜0.05）,但各处理组的受精率、18日活胚率、孵化率和健雏率均无显著性差异（P＞0.05）。【结论】30—39周龄岭南黄羽肉种鸡获得最佳繁殖性能的日粮适宜ME和CP水平分别为11.92 MJ•kg-1和16.5%,每日ME和CP需要量分别为1.55 MJ和21.45 g。     

藏猪在亚热带条件下的生长特性及其杂交利用效果

为了探究藏猪在亚热带环境条件下的生长特性及其杂交利用效果,本研究根据藏猪、杜洛克猪和广东小耳花猪开展不同组合的杂交试验结果分析比较在广州亚热带环境条件下藏猪及杂交猪的繁殖性能、生长性能、胴体特性和肉质特性。结果表明,在亚热带环境下,藏猪、杜藏猪、藏杜花猪的窝均产仔数在各杂交实验组间无显著差异,杜藏二元杂仔猪初生体质量和35日龄断奶体质量显著高于纯种藏猪。在生长试验中,藏猪、杜藏猪、藏杜花猪的平均日增重分别为(201.43±25.41)、(469.67±41.13)和(425.54±58.37)g,杜藏二元杂交猪和杜藏花三元杂交猪生长速度显著高于纯种藏猪,生长速度的杂交优势明显。杜藏二元杂交猪和杜藏花三元杂交猪胴体质量显著高于藏猪,杜藏二元杂交猪皮率显著低于纯种藏猪。肉质分析结果显示,大理石纹评分和肌内脂肪含量以杜藏猪最高,嫩度以纯种藏猪最佳。综上所述,将高原藏猪迁至亚热带地区饲养后,其窝均产仔数和仔猪断奶成活率较原产地藏猪有所提高,表明藏猪适合在广州地区生长;在亚热带环境条件下,通过将藏猪与杜洛克、广东小耳花猪进行杂交可以显著提高后代生长速度同时提升了猪肉质品质、养殖效益,缩短了饲养周期,同时本研究也为藏猪的杂交利用提供了基础数据支持。     

日粮精氨酸水平对蛋鸭卵泡膜血管形成相关基因及蛋白表达的影响

本试验旨在研究日粮精氨酸（Arg）水平对蛋鸭卵泡膜血管形成相关基因及蛋白表达的影响。试验选用健康、体重相近的15周龄龙岩山麻鸭396只,随机分为3组,每个组6个重复,每个重复22只,地面平养。试验蛋鸭饲喂不添加Arg的基础日粮（含0.66%精氨酸）2周后,分别饲喂在基础日粮中添加0、0.4%、0.8% L-精氨酸盐酸盐（L-Arg·HCl）的试验日粮,其Arg水平分别为0.66%、1.06%和1.46%,试验期17周。结果显示：①1.06%和1.46% Arg组试验蛋鸭血浆低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、卵巢一氧化氮（NO）浓度均显著高于0.66% Arg组（P < 0.05）。②与0.66% Arg相比,1.06%、1.46% Arg组显著上调了试验蛋鸭F2优势卵泡膜同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）mRNA表达水平。而1.46% Arg试验蛋鸭F2优势卵泡膜血管生成素1（Ang1）mRNA表达水平显著高于0.66%、1.06% Arg组（P < 0.05）。③与0.66% Arg相比,1.06%、1.46% Arg组著上调了试验蛋鸭F2优势卵泡膜HIPK2及转化生长因子β1（TGFβ1）蛋白表达水平（P < 0.05）。综上所述,日粮1.46% Arg（在基础日粮中添加0.8% L-Arg·HCl）可通过激活TGFβ信号通路关键因子TGFβ1和HIPK2促进龙岩山麻鸭F2优势卵泡膜血管的形成,增加血流量,促进其优势卵泡的卵黄沉积。     

甘薯产品营养价值及其在畜禽生产中的应用

甘薯产量高、种植面积广，含有丰富的营养物质，具有良好饲用价值。甘薯块根部分淀粉含量较多，可作为能量饲料使用|甘薯茎叶蛋白质含量丰富，可作为畜禽饲料良好蛋白质来源|青贮加工后能提高饲用价值|加工副产品价格低廉，具有良好利用潜能。本文总结了不同甘薯产品的营养成分、有效能等研究，及其在畜禽生产中的应用，为甘薯饲用研发和应用提供重要参考。 [关键词] 甘薯块根|甘薯茎叶|甘薯青贮物|甘薯加工副产品|营养成分|畜禽应用